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抗核抗体谱(IgG)检测试剂盒(免疫印迹法)

预期用途 用于体外定性检测人血清中的多种自身免疫抗体(抗RNP68、RNPA、RNPC、SmB、SmD、Ro/SSA60、Ro/SSA 52、La/SSB、Rib-P、PCNA、CENPB、Scl70、Jo-1、Histon和dsDNA抗体)。
产品编码 HAE202020
规格型号 20T/盒
样本类型 血清、血浆
检测时间 约90分钟
储存温度 2-8℃
有效期 12个月
注册证号 粤械注准20152400520
产品参数
预期用途
用于体外定性检测人血清中的多种自身免疫抗体(抗RNP68、RNPA、RNPC、SmB、SmD、Ro/SSA60、Ro/SSA 52、La/SSB、Rib-P、PCNA、CENPB、Scl70、Jo-1、Histon和dsDNA抗体)。
产品编码
HAE202020
规格型号
20T/盒
样本类型
血清、血浆
检测时间
约90分钟
储存温度
2-8℃
有效期
12个月
注册证号
粤械注准20152400520
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产品详情

检验原理

本试剂盒将高纯度的重组核抗原和天然抗原印迹于硝酸纤维素膜上。检测时,先将反应膜条与稀释的血清进行孵育,通过抗原-抗体反应将抗体吸附到反应膜条上,未吸附的抗体经过洗涤步骤被去除;然后将反应膜条与酶标抗人IgG抗体进行孵育,再加入酶的底物进行显色反应,如果样品中含有特异性自身抗体,则可通过显色反应检测出来,在反应膜条相应的位置上显示出反应条带。否则,不显示反应条带。


主要组成成分

试剂盒主要由抗原预包被反应膜条,酶结合物(抗人IgG-HRP)、缓冲液、显色液等组成。

试剂盒组成:

序号

试剂盒组成

包装规格

1.

反应膜条

2×10人份

2.

酶结合物

0.5mL

3.

缓冲液(10×)

50mL

4.

脱脂奶粉

2.5g

5.

显色液

35mL

6.

结果判读卡

1份

7.

反应槽

2×10个(选配)

8.

使用说明书

1份

反应膜条由检测区(包被RNP68、RNPA、RNPC、SmB、SmD、Ro/SSA60、Ro/SSA 52、La/SSB、Rib-P、PCNA、CENPB、Scl70、Jo-1、Histon、dsDNA抗原)、质控区(包被抗人IgG)及硝酸纤维素膜等支持物构成,其结构见下图:

缓冲液的主要成份有磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、NaCl、KCl。

试验所需而未提供的材料:

精密移液器及取样吸头、镊子、一次性试管、蒸馏水或去离子水、漩涡混匀器、摇床、计时器


检验方法

1. 工作缓冲液(A)的准备

(1)工作缓冲液(A)用于血清稀释、酶结合物的稀释及反应膜条的洗涤。

(2)将脱脂奶粉溶于浓缩缓冲液中(1份脱脂奶粉+20份浓缩缓冲液);然后用去离子水将该混合物补水至终体积(溶解有脱脂奶粉的浓缩缓冲液1份+去离子水9份),制成工作缓冲液(A),如下表1所示。

表1:工作缓冲液(A)的配制方案

反应膜条用量

脱脂奶粉

浓缩缓冲液

去离子水

工作缓冲液(A)

1

0.1g

2mL

18 mL

20 mL

例如:1条反应膜条的工作缓冲液(A)用量为20mL,可将0.1g脱脂奶粉溶解于2mL浓缩缓冲液中,然后加入18mL去离子水,制成工作缓冲液(A)。

(3)表中未列出的反应膜条数量所需的工作缓冲液(A)的体积需要计算确定。

2. 酶结合物工作液(B)的准备

(1)酶结合物溶液(B)须现用现配。

(2)1份酶结合物与100份工作缓冲液(A)混合成为酶结合物工作液(B),见下表2。

表2:抗人IgG酶标结合物工作液制备方案

反应膜条用量

酶标结合物用量

工作缓冲液(A)用量

1

20μL

2 mL

例如:1条反应膜条的酶结合物工作液(B)用量为2mL,可用20μL酶结合物与2mL工作缓冲液(A)混合而成。

(3)表中未列出的反应膜条数量所需的工作缓冲液的体积需要计算确定。

3. 显色液

显色液为即用型。在开始显色反应前将其平衡至室温(18~25℃)。

4.检验程序

将试剂盒恢复至室温(18~25℃),以下所有检测程序均在室温(18~25℃)下进行;

4.1 样品孵育:

(1)在每个反应槽中加入2mL的工作缓冲液(A);

(2)用镊子将反应膜条小心地完全浸泡到每个装有工作缓冲液(A)的反应槽中,反应膜条的编码应面朝上方;

(3)再用移液器吸取20μL血清样品,加入到对应的反应槽中;

(4)用塑料盖子将反应槽盖好,于室温(18~25℃)下轻微振荡孵育1小时。

4.2 洗涤:

(1)孵育后,小心地将盖子打开,吸去每个反应槽中的反应溶液;

(2)每个反应槽中加入2mL的工作缓冲液(A),在振荡器上轻微晃动洗涤5分钟,吸去缓冲液。

(3)重复步骤(2)洗涤,共3次。

4.3 酶结合物孵育:

洗涤膜条后,在每个反应槽中加入酶结合物工作液(B)2mL,盖好盖子,室温下振荡孵育45分钟。

4.4 洗涤:

吸去酶结合物溶液,按2步骤洗涤反应膜条。

4.5 显色反应:

每个反应槽中加入1.5mL显色液,在室温下轻微振荡孵育1-5分钟,并实时观察,质控线2一旦出现应立刻终止反应。

4.6 终止反应:

(1)吸去显色液,用去离子水清洗反应膜条3次,每次1分钟。

(2)用镊子小心地将反应膜条从水中夹出,并将其放置在2层吸水纸中间干燥。之后将反应膜条与结果判读卡对比,记录阳性条带结果。

(3)使用过的反应膜条应避光保存。


结果解释

将反应膜条质控线1与结果判读卡上的质控线1对齐,之后按照结果判读卡上对应的项目进行判读。

目视或使用自身免疫检测仪进行结果判读,比对反应膜条上显色的条带强度和质控线2的显色强度:


反应膜条显色带强度

判读结果

1. 反应膜条无显色条带或显色带强度比质控线2弱

阴性(-)

2. 反应膜条显色带强度与质控线2强度相当

待确认(±)

3. 反应膜条显色带强度强于质控线2

阳性(+)





阳性结果

相关的自身免疫疾病

抗Rib-P抗体阳性

系统性红斑狼疮

抗PCNA抗体阳性

抗dsDNA抗体阳性

抗Histon抗体阳性

抗SmB抗体阳性

抗SmD抗体阳性

抗Ro/SSA60抗体阳性

干燥综合征

抗Ro/SSA52抗体阳性

抗La/SSB抗体阳性

抗RNP68抗体阳性

混合性结缔组织病

抗RNPA抗体阳性

抗RNPC抗体阳性

抗CENPB抗体阳性

进行性系统性硬皮病

抗Scl 70抗体阳性

抗Jo-1抗体阳性

多发性肌炎

说明:

1.任何情况下只要质控线不显色,结果无效,应重新测试。

2.过量的加样可导致不明确的、无诊断价值的颜色出现,此时应重新测试。

3.由于不正确的样品采集和保存可能得到假阴性结果。