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抗核抗体筛查(ANA-Screen)检测试剂盒(酶联免疫法)

预期用途 本试剂盒临床适用于体外定性检测人血清中的抗核抗体-IgG类抗体。临床上主要用于系统性红斑狼疮(SLE),类风湿关节炎(RA)和干燥综合征(SS)等多种结缔组织病的辅助诊断。
产品编码 HAE223096
规格型号 96T/盒
样本类型 血清、血浆
检测时间 约90分钟
储存温度 2-8℃
有效期 12个月
注册证号 粤械注准20152401164
产品参数
预期用途
本试剂盒临床适用于体外定性检测人血清中的抗核抗体-IgG类抗体。临床上主要用于系统性红斑狼疮(SLE),类风湿关节炎(RA)和干燥综合征(SS)等多种结缔组织病的辅助诊断。
产品编码
HAE223096
规格型号
96T/盒
样本类型
血清、血浆
检测时间
约90分钟
储存温度
2-8℃
有效期
12个月
注册证号
粤械注准20152401164
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产品详情

检测原理

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附实验技术,检测人血清中的抗核抗体(ANA)。包被抗原为多重纯化核抗原(Sm、RNP/Sm、SS-A(Ro)、SS-B(La)、Scl-70、Jo1、U1-SmRNP、CENP-B、dsDNA和Histone抗原),待测样本中的ANA可与之结合。以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgG作为第二抗体,在固相上形成核抗原-ANA-抗人IgG-HRP复合物,洗去未反应物,加入显色剂产生呈色反应,其颜色深浅与ANA的水平相关,其含量可通过酶标分析仪定性判断结果。


主要组成成份

试剂盒组成

序号

名称

规格

数量

组成成份

1

微孔板

96孔

1块

包被多重纯化核抗原

2

临界质控品

1.2ml

1瓶

0.1M PBS,ANA

3

阳性企业参考品

1.2ml

1瓶

0.1M PBS,ANA阳性血清

4

阴性企业参考品

1.2ml

1瓶

0.1M PBS,ANA阴性血清

5

酶结合物

15.0ml

1瓶

抗人IgG-HRP(兔)

6

样本稀释液

50.0ml

2瓶

0.1M PBS,Proclin300

7

浓缩洗涤液(20×)

25.0ml

1瓶

   0.2M PBST

8

显色液

15.0ml

1瓶

TMB/H2O2

9

终止液

12.0ml

1瓶

0.15M H2SO4

10

干燥剂

0.5g

1包


11

封板膜


3片


12

说明书


1份


注:不同批次的试剂不能混用,不能使用过期的试剂。

试验所需材料但试剂盒未提供

1. 精密移液器及取样吸头;

2. 洗涤瓶,自动化或半自动化的洗板机;

3. 带450nm(参考波长620~650nm)滤光片的酶标仪;

4. 一次性试管;

5. 蒸馏水或去离子水;

6. 纸巾及计时器。


检验方法

样本及试剂准备

1. 将试剂和样本从冰箱中取出,平衡至室温(约30分钟)。

2. 抗原包被的微孔板,直接使用。一次未使用完的板条,为防止受潮,剩余板条应用封板膜封好后,随同干燥剂立即放回铝箔袋内重新密封,2~8℃保存。

3. 临界质控品、阳性企业参考品、阴性企业参考品、酶结合物及样本稀释液,充分混匀,直接使用。

4. 浓缩洗涤液,用蒸馏水或去离子水20倍稀释使用(例如:10ml浓缩洗涤液加190ml蒸馏水或去离子水),临用时配制。若浓缩洗涤液中有结晶析出,稀释前应37℃加温,充分溶解混匀。

5. 显色液、终止液,直接使用。显色液应无色澄清,因对光敏感,使用后应立即盖好瓶盖,若变色,则不能再使用。

6. 血清样本,临用时按1:101比例用样本稀释液稀释,并充分混匀。(例如:10μl血清样本加1.0ml样本稀释液)


实验步骤

1. 加样孵育:按加样设置分别向微孔内加入临界质控品、阳性企业参考品、阴性企业参考品、已稀释样本各100ul, 贴上封板膜,室温(18~25℃)孵育30分钟。

2. 洗涤:手工洗涤 弃去微孔板内液体,用预先配制好的洗涤液,加入300μl,静置30秒后弃去,重复3次,吸水纸上拍干。

   上机洗涤 在洗板机上设置洗涤程序,洗涤液400μl,重复3次,取出后吸水纸上拍干。

3. 加酶结合物孵育:微孔板各孔内分别滴加,酶结合物100μl,贴上封板膜,室温(18~25℃)孵育30分钟。

4. 洗涤:弃去微孔板内液体,按流程(2)清洗。

5. 加显色液孵育:微孔板各孔内分别滴加,显色液100μl(2滴),贴上封板膜,室温(18~25℃)孵育15分钟。

6. 终止反应:微孔板各孔内分别滴加终止液100μl(2滴)。

7. 比色:加入终止液后5分钟内,轻微振摇微孔板使孔内液体均匀扩散,酶标仪450nm波长下比色,参考波长为620nm到650nm,并记录OD值。若使用单波长450nm检测时需设置空白对照。