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抗髓过氧化物酶(MPO)抗体检测试剂盒(酶联免疫法)

预期用途 本试剂盒临床适用于体外定性和定量检测人血清中的抗髓过氧化物酶-IgG类抗体。临床上主要用于Wegener肉芽肿(WG),显微镜下多血管炎等原发性系统性血管炎的辅助诊断。
产品编码 HAE253096
规格型号 96T/盒
样本类型 血清、血浆
检测时间 约90分钟
储存温度 2-8℃
有效期 12个月
注册证号 粤械注准20162400090
产品参数
预期用途
本试剂盒临床适用于体外定性和定量检测人血清中的抗髓过氧化物酶-IgG类抗体。临床上主要用于Wegener肉芽肿(WG),显微镜下多血管炎等原发性系统性血管炎的辅助诊断。
产品编码
HAE253096
规格型号
96T/盒
样本类型
血清、血浆
检测时间
约90分钟
储存温度
2-8℃
有效期
12个月
注册证号
粤械注准20162400090
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产品详情

检测原理

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附实验技术,检测人血清中的抗髓过氧化物酶(MPO)抗体。包被抗原为MPO纯化抗原,待测样本中的抗MPO抗体可与之结合。以辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgG作为第二抗体,在固相上形成MPO-抗MPO-抗人IgG-HRP复合物,洗去未反应物,加入显色剂产生呈色反应,其颜色深浅与抗MPO抗体的水平相关,其含量可通过酶标分析仪定量判断结果。


主要组成成份

1. 试剂盒组成

序号

名称

规格

数量

组成成份

1

微孔板

96孔

1块

包被MPO纯化抗原

2

校准品

1.2ml

5瓶

C1-C5:0.0、10.0、20.0、40.0、160.0(AU/ml)

0.1M PBS,anti-MPO(人)

3

阳性企业参考品

1.2ml

1瓶

0.1M PBS,抗MPO阳性血清

4

阴性企业参考品

1.2ml

1瓶

0.1M PBS,抗MPO阴性血清

5

酶结合物

15.0ml

1瓶

抗人IgG-HRP(兔)

6

样本稀释液

50.0ml

2瓶

0.1M PBS,Proclin300

7

浓缩洗涤液(20×)

25.0ml

1瓶

0.2M PBST

8

显色液

15.0ml

1瓶

TMB/H2O2

9

终止液

12.0ml

1瓶

0.15M H2SO4

10

干燥剂

0.5g

1包


11

封板膜


3片


12

说明书


1份


注:不同批次的试剂不能混用,不能使用过期的试剂。

2. 试验所需材料但试剂盒未提供

a) 精密移液器及取样吸头

b) 洗涤瓶,自动化或半自动化的洗板机

c) 带450nm(参考波长620~650nm)滤光片的酶标仪

d) 一次性试管

e) 蒸馏水或去离子水

f) 纸巾及计时器


检验方法

样本及试剂准备

1. 将试剂和样本从冰箱中取出,平衡至室温(约30分钟)。

2. 抗原包被的微孔板,直接使用。一次未使用完的板条,为防止受潮,剩余板条应用封板膜封好后,随同干燥剂立即放回铝箔袋内重新密封,2~8℃保存。

3. 校准品、阳性企业参考品、阴性企业参考品、酶结合物及样本稀释液,充分混匀,直接使用。

4. 浓缩洗涤液,用蒸馏水或去离子水20倍稀释使用(例如:10ml浓缩洗涤液加190ml蒸馏水或去离子水),临用时配制。若浓缩洗涤液中有结晶析出,稀释前应37℃加温,充分溶解混匀。

5. 显色液、终止液,直接使用。显色液应无色澄清,因对光敏感,使用后应立即盖好瓶盖,若变色,则不能再使用。

6. 血清样本,临用时按1:101比例用样本稀释液,稀释并充分混匀。(例如:10μl血清样本加1.0ml样本稀释液)


检测步骤

1. 加样孵育:按加样设置分别向微孔内加入校准品、阳性企业参考品、阴性企业参考品、已稀释样本各100μl,贴上封板膜,室温(18~25℃)孵育60分钟。

2. 洗涤:手工洗涤 弃去微孔板内液体,用预先配制好的洗涤液,加入300μl,静置30秒后弃去,重复3次,吸水纸上拍干。

  上机洗涤 在洗板机上设置洗涤程序,洗涤液400μl,重复3次,取出后吸水纸上拍干。

3. 加酶结合物孵育:微孔板各孔内分别滴加,酶结合物100μl,贴上封板膜,室温(18~25℃)孵育30分钟。

4. 洗涤:弃去微孔板内液体,按流程(b)清洗。

5. 加显色液孵育:微孔板各孔内分别滴加,显色液100μl(2滴),贴上封板膜,室温(18~25℃)孵育15分钟。

6. 终止反应:微孔板各孔内分别滴加终止液100μl(2滴)。

7. 比色:加入终止液后5分钟内,轻微振摇微孔板使孔内液体均匀扩散,酶标仪450nm波长下比色,参考波长为620nm到650nm,并记录OD值。若使用单波长450nm检测时需设置空白对照。