抗蛋白酶3（PR3）抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

检测原理

本试剂盒采用间接酶联免疫吸附实验技术，检测人血清中的抗蛋白酶3(PR3)抗体。包被抗原为PR3纯化抗原，待测样本中的抗PR3抗体可与之结合。以辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人IgG作为第二抗体，在固相上形成PR3-抗PR3抗人-IgG-HRP复合物，洗去未反应物，加入显色剂产生呈色反应，其颜色深浅与抗PR3抗体的水平相关，其含量可通过酶标分析仪定量判断结果。

主要组成成份

1. 试剂盒组成

注：不同批次的试剂不能混用，不能使用过期的试剂。

2.试验所需材料但试剂盒未提供

a) 精密移液器及取样吸头

b) 洗涤瓶，自动化或半自动化的洗板机

c) 带450nm（参考波长620～650nm）滤光片的酶标仪

d) 一次性试管

e) 蒸馏水或去离子水

f) 纸巾及计时器

检验方法

样本及试剂准备

1. 将试剂和样本从冰箱中取出，平衡至室温（约30分钟）。

2. 抗原包被的微孔板，直接使用。一次未使用完的板条，为防止受潮，剩余板条应用封板膜封好后，随同干燥剂立即放回铝箔袋内重新密封，2～8℃保存。

3. 校准品、阳性企业参考品、阴性企业参考品、酶结合物及样本稀释液，充分混匀，直接使用。

4. 浓缩洗涤液，用蒸馏水或去离子水20倍稀释使用(例如：10ml浓缩洗涤液加190ml蒸馏水或去离子水)，临用时配制。若浓缩洗涤液中有结晶析出，稀释前应37℃加温，充分溶解混匀。

5. 显色液、终止液，直接使用。显色液应无色澄清，因对光敏感，使用后应立即盖好瓶盖，若变色，则不能再使用。

6. 血清样本，临用时按1:101比例用样本稀释液，稀释并充分混匀。(例如：10μl血清样本加1.0ml样本稀释液)

检测步骤

1. 加样孵育：按加样设置分别向微孔内加入校准品、阳性企业参考品、阴性企业参考品、已稀释样本各100μl，贴上封板膜，室温(18～25℃)孵育60分钟。

2. 洗涤：手工洗涤 弃去微孔板内液体，用预先配制好的洗涤液，加入300μl，静置30秒后弃去，重复3次，吸水纸上拍干。

上机洗涤 在洗板机上设置洗涤程序，洗涤液400μl，重复3次，取出后吸水纸上拍干。

3. 加酶结合物孵育：微孔板各孔内分别滴加，酶结合物100μl，贴上封板膜，室温(18～25℃)孵育30分钟。

4. 洗涤：弃去微孔板内液体，按流程(b)清洗。

5. 加显色液孵育：微孔板各孔内分别滴加，显色液100μl（2滴），贴上封板膜，室温(18～25℃)孵育15分钟。

6. 终止反应：微孔板各孔内分别滴加，终止液100μl（2滴）。

7. 比色：加入终止液后5分钟之内，轻微振摇微孔板使孔内液体均匀扩散，酶标仪450nm波长下比色，参考波长为620nm到650nm，并记录OD值。若使用单波长450nm检测时需设置空白对照。